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Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADCs): der Königsweg zur Behandlung

Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADCs): der Königsweg zur Behandlung
Hintergrund

In den letzten Jahren konnten Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADCs) ihre neuartige therapeutische Möglichkeit für viele Krebspatienten zeigen. Tatsächlich definieren drei Schlüsselelemente ein ADC: der gegen ein spezifisches Tumorantigen gerichtete Antikörper, der Zytotoxin-Wirkstoff (payload) und der spaltbare/unspaltbare Linker, der den Wirkstoff (payload) mit dem Antikörper verbindet [1]. Spezifische Zielerkennung und wirksames Toxin machen ADCs zu wahren „Wunderwaffe“. (magic bullet – Wunderwaffe or „Königsweg“ sounds more seroius that „Wundermittel“ Diese „Wunderwaffe“ ermöglicht eine Behandlung, die sowohl hochgradig zielgerichtet als auch hochwirksam ist, indem sie Krebszellen im ganzen Körper aufspüren und angreifen kann, während gesunde Zellen nicht geschädigt werden. Eine sinnvolle Auswahl von Zielmolekülen, Antikörpern, Linkern, Nutzlasten und deren sinnvolle Kombinationen sowie Konjugationsmethoden sind für eine wirksame Behandlung entscheidend. Innerhalb dieser Kriterien gehören die Auswahl des Targets, die Auswahl der Linker, die Konjugationsmethoden und die Bewertung der voräklinischen/klinischen Wirksamkeit zu den entscheidenden Faktoren für die Entwicklung von ADCs.>>> Download the ebook: Key point of ADCs design

Um die Anforderungen der ADC-Entwicklung zu erfüllen, kann ACROBiosystems folgendes bereitstellen:
Eine Vielzahl hochwertiger Zielproteine;
MMPs/Cathepsin/uPA für spaltbare Linker;
ADC ortsspezifische Konjugationskits;
Anti-Payload-Antikörper, anti-idiotypische Antikörper (ADA) für Immunogenitäts- und PK-Analyse.
SPR/BLI-Analyse und anti-diotypische Antikörperentwicklung.
Structure of ADCs
Alle Produkte und Dienstleistungen können den gesamten ADC-Prozess abdecken, von der Antikörpervorbereitung, dem ersten Screening, über die Produktion bis hin zur Qualitätskontrolle, um damit die Entwicklung Ihrer ADCs zu unterstützen.
Neueste Produkte
Hochwertige ADC-Zielproteine
ADC-related target proteins

Merkmale

  1. 1. >> 50+ ADC-Targets wie Trop-2, Nectin-4,LIV-1 and ROR1;

  2. 2. >> Verschiedene Arten & Markierungen/Tags;

  3. 3. >> Hohe Reinheit bestätigt durch MALS;

  4. 4. >> Hohe Bioaktivität bestätigt durch ELISA / SPR / BLI / FACS usw.

Anwendungen

  • Geeignet für Immunisierung/Antikörper-Screening/Kreuzreaktivität/zellbasierte Assays/QC.

Ausgewählte Produkte

  • Exklusive LIV-1 Proteine:

  • ✔ Mehrere Arten: Mensch, Maus, Javaneraffe/Cynomolgus, Ratte usw.;

  • ✔ Expressionssequenzen wurden basierend auf dem SGN-LIV1A-Bindungsepitop entwickelt.

Proteasen für Peptidlinker
Cathepsin B, Proteases for peptide linker in ADCs

Merkmale

  1. 1. >> Umgangreiche (übergreifende) as in a lot or in sub categories? Produkte: Cathepsin, MMPs und uPA usw.;

  2. 2. >> Natürliche Konformation: HEK293 exprimiertes Protein, um die natürliche Struktur sicherzustellen;

  3. 3. >> Hohe Enzymaktivität: Enzymaktivität > 2.500 pmol/min/µg.

Anwendungen

  • ✔ Bewertung der Wirkung der Linkerspaltung durch Proteasen, um die effiziente Freisetzung der intrazellulären Wirkstoffe (payload) sicherzustellen.

Tools zur PK-Analyse von ADCs
Anti-MMAE antibodies and anti-idiotypic antibodies for ADCs PK analysis

Merkmale

  1. 1. >> Umgangreiche (übergreifende) as in a lot or in sub categories? Produkte:Anti-MMAE-Antikörper und anti-idiotypische Antikörper;

  2. 2. >> Hohe Spezifität und Affinität;

  3. 3. >> Hohe Empfindlichkeit und Stabilität.

Anwendungen

  • ✔ Positive Referenz der vorklinischen/klinischen Immunogenität von ADCs;

  • ✔ PK-Analyse;

  • ✔ Anti-Payload-Antikörper: Qualitative Erkennung des DAR-Werts.

Ausgewählte Produkte

  • Die Aktivität des monoklonalen Anti-MMAE-Antikörpers (Kat.-Nr. MME-M5252) wurde durch die Bindung an Disitamab Vedotin (RC-48) innerhalb eines linearen Bereichs von 0,1–2 ng/ml bestätigt.

SPR/BLI analytical & ADA development service
SPR /BLI analytical service

SPR /BLI-Analyseservice

  1. ACRO-Proteine werden kostenlos zur Verfügung gestellt
  2. Es werden nur Ihre Proben benötigt
  3. Die Berichte entsprechen allen IND-Anforderungen

    Anwendungen

  • Auf der Grundlage der Plattformen Biacore 8K und ForteBio Octet bietet ACROBiosystems Kunden aus der biopharmazeutischen Forschung und Entwicklung ergänzende Dienstleistungen im Bereich der molekularen Interaktionsanalyse, einschließlich Antikörperscreening, Charakterisierung, Konsistenzbewertung und Biomolekülinteraktionen, um somit zur Entwicklung von Therapeutika beizutragen.
Anti-Idiotypic Antibody Development Service

Anti-Idiotypischer Antikörper-Entwicklungsservice

  1. Schnelle Bearbeitung, individueller Service
  2. Sicherstellung der Lieferung von PK/ADA-Testkits mit Empfindlichkeit
  3. Kostenlose Lieferung von ACRO-Proteinen

    Service

  • ✔ Monoklonale/polyklonale Anti-Idiotyp-Antikörper, pharmakokinetische und Immunogenitäts-Testkits.
  • Anwendungen

  • ✔ ADA-Test: Perfekt als Kalibrator;
  • ✔ PK-Assay: Quantitative Analyse von therapeutischem Antikörper in der Matrix

Produktliste
  • ADC-Zielproteine

  • Proteasen für Peptidlinker

  • AGLink™ ADC site-specific conjugation kits

  • Tools zur PK-Analyse von ADCs

Molecule Cat. No. Product Description Preorder/Order
Molecule Cat. No. Product Description Preorder/Order

> Anti-Payload antibody

Molecule Cat. No. Product Description Preorder/Order

> Anti-Idiotypic Antibody

Molecule Cat. No. Product Description Neutralizing activity Application
Adalimu*ab ADB-Y19 Anti-Adalimu*ab Antibodies (AY19) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-Y10 Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY10) (MALS verified, recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-Y12 Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY12) (recommended for neutralizing assay) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-Y9 Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY9) (recommended for ADA assay) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-BY13 Biotinylated Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY13) (recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-Y27 Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY27) (recommended for ADA assay) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-Y31 Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY31) (Non-Neutralizing) Non-Neutralizing Antibody ADA assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-Y28 Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY28) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-BY31 Biotinylated Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY31) (recommended for PK/PD) Non-Neutralizing Antibody PK bridging ELISA; Indirect ELISA
Rituxi*ab RIB-Y36 Anti-Rituxi*ab Antibodies (AY36) (recommended for ADA assay) Neutralizing Antibody ADA assay;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Rituxi*ab RIB-Y37 Anti-Rituxi*ab Antibodies (AY37) (recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA;Neutralizing assay;Indirect ELISA
Trastuzu*ab TRB-Y5b Anti-Trastuzu*ab Antibodies (AY5b) (recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA
Hochwertige ADC-Zielproteine
TROP-2
                   
Nectin-4
                   
EGFR
                   
Her2
                   
CEACAM-5
                   
CD79B
                   
PSMA
                   
Claudin18.2
                   
FOLR1
                   
Siglec-3
                   
BCMA
                   
Siglec-2
                   
CD19
                   
CD30
                   
DLL3
                   
PTK7
                   
TF
                   
TF
                   
ROR1
                   
ENPP3
                   
LIV-1
                   
HGFR
                   
NCAM-1
                   
EGFRvIII
                   
CD133
                   
LY75

Fallstudie

Hohe Reinheit durch MALS bestätigt
HER2, MALS-validated protein

The purity of Human Her2, His Tag (Cat. No. HE2-H5225) was more than 90% and the molecular weight of this protein is around 80-95 kDa verified by SEC-MALS.

Hohe Affinität durch ELISA bestätigt
HER2 protein's affinity verified by ELISA

Immobilized Human TROP-2, His Tag (Cat. No. TR2-H5223) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Mouse Monoclonal Antibody Against Human TROP-2, Mouse IgG1 with a linear range of 0.1-2 ng/mL (QC tested).

PSMA protein's affinity verified by ELISA

Immobilized Human PSMA, His Tag (Cat. No. PSA-H52H3) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-Human PSMA Antibody, Human IgG1 with a linear range of 0.3-39 ng/mL (Routinely tested).

Hohe Affinität durch SPR bestätigt
LIV-1 protein's affinity verified by SPR

Anti-LIV-1 mAb captured on CM5 chip via anti-human IgG Fc antibody can bind Human LIV-1, His Tag (Cat. No. LV1-H5223) with an affinity constant of 5.24 nM as determined in a SPR assay (Biacore T200) (Routinely tested).

HER2 protein's affinity verified by SPR

Trastuz*mab captured on CM5 chip via anti-human IgG Fc antibodies surface, can bind Human Her2, His Tag (Cat. No. HE2-H5225) with an affinity constant of 1.07 nM as determined in a SPR assay.

High affinity validated by BLI
Nectin-4 protein's affinity verified by BLI

Loaded Mouse Nectin-4, His Tag (Cat. No. NE4-M52H3) on HIS1K Biosensor, can bind Human Nectin-1, Fc Tag (Cat. No. PV1-H5253) with an affinity constant of 0.12 μM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).

High affinity validated by FACS
ROR1 protein's affinity verified by BLI

2e5 of anti-ROR1 CAR-293 cells were stained with 100 μL of 10 μg/mL of Human / Cynomolgus / Rhesus macaque ROR1 (39-151, Ig-like domain), His Tag (Cat. No. RO1-H5221) and negative control protein respectively, washed and then followed by PE-anti-His Tag and analyzed with FACS (Routinely tested).

Proteasen für Peptidlinker
Beim Design und der Entwicklung von ADC beeinflusst der Linker die Stabilität von ADCs im systematischen Kreislauf, die Geschwindigkeit der lysosomalen Verarbeitung usw. In aktuellen ADC-Medikamenten gibt es zwei Hauptkategorien von ADC-Linkern, und zwar spaltbare Linker und nicht spaltbare Linker.
In den meisten ADCs in klinischen Tests werden Peptidlinker als Protease-empfindlicher spaltbarer Linker verwendet. Beim Design von Peptidlinkern ist es notwendig, die Auswahl einer geeigneten Protease für die Linkerspaltung zu berücksichtigen, wie zum Beispiel: MMPs/Cathepsin/ PLAU [2].
Thus, ACROBiosystems has developed a series of MMPs, Cathepsin and uPA protein products for cleavage of Linker.
Daher hat ACROBiosystems eine Reihe von MMPs, Cathepsin und uPA-Proteinprodukten zur Spaltung von Linkern entwickelt.
Mechanisms of action of ADCs

Fallstudie

Products Cat. No.CTB-H5222 Human Cathepsin B / CTSB Protein, His Tag (active enzyme) Cat. No.MM9-H5221 Human MMP-9 Protein, His Tag (active enzyme)
Hydrolyzed substrate Fluorogenic peptide substrate Z-LR-AMC Fluorogenic peptide substrate Mca-PLGL-Dpa-AR-NH2
Enzymatic activity
(pmol/min/μg)
> 2500 > 2500
ADC ortsspezifische Konjugationskits
Konjugationsmethoden werden im Allgemeinen in zufällige Konjugation und ortsspezifische Konjugation unterteilt. Die zufällige Konjugation kann mehrere Probleme verursachen, darunter einen suboptimalen therapeutischen Index, ein engeres therapeutisches Fenster und eine schlechte Stabilität. Ortsspezifische Konjugationen sollen die Heterogenität überwinden, die bei ADCs beobachtet wird, die eine zufällige Konjugation an oberflächenexponierte Lysinreste oder eine Konjugation an Disulfidbindungen zwischen den Ketten verwenden. Durch die ortsspezifische Konjugation können die Konjugationsstellen genau kontrolliert werden, so dass eine homogene Mischung entsteht, die wirksamere ADCs hervorbringt. Die Merkmale der verschiedenen Konjugationsmethoden für ADCs
The characteristics of various conjugation methods applied for ADCs
The characteristics of various conjugation methods applied for ADCs[3]
AGLink ADC ortsspezifische Konjugations-kits werden gemeinsam von ACROBiosystems und Glyco-therapy Biotechnology Co., Ltd. entwickelt und basieren auf der Konjugationsplattform (YTConjuTM) von Glyco-therapy Biotechnology Co., Ltd.[4]. AGLink ermöglicht die enzymatische Modifizierung von IgG-Fc-Glykanen, die zu homogenen Konjugaten führen, die für die frühe wissenschaftliche Erforschung von ADCs verwendet werden können.

Mechanismus der Konjugation

AAlle monoklonalen Antikörper sind an (oder um) Asparagin 297 (N297) glykosyliert. Die inhärente Stellenspezifität der Fc-Glykosylierung macht das Glyko-Engineering zu einem anerkannten universellen und effizienten Ansatz für die Synthese homogener Antikörperkonjugate. Schematische Darstellungen sind wie folgt[4]
AGlink ADC Conjugation Kit (MMAE, DAR4)
AGlink ADC Conjugation Kit (MMAE, DAR4)
AGlink ADC Conjugation Kit (MMAE, DAR2)
AGlink ADC Conjugation Kit (MMAE, DAR2)

Assay-Daten

Hohe Homogenität konjugierter Antikörper
HIC-HPLC analysis of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2)

HIC-HPLC analysis of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2)

Durchgängige Immunreaktivität nach Konjugation
The analysis of the antigen-binding capacity of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2)

The analysis of the antigen-binding capacity of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2), the results showing that binding to the HER2 antigen unaffected by the AGLink conjugation

Die Konsistenz des ortsspezifischen Kennzeichnungsprozesses gewährleistet, dass die Aggregation gemildert wird.
Less than 5% of antibody aggregation by SEC-HPLC

Less than 5% of antibody aggregation by SEC-HPLC

Die Konjugate haben eine hohe In-vitro-Plasmastabilität
The conjugates have high in-vitro plasma stability

MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2) are stable in human plasma in vitro

In-vitro-Test der zelltötenden Aktivität
In-vitro cell-killing activity assay

Validated in-vitro cell-killing activity of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2)

PK-Analyse
Zur Unterstützung der Immunogenitäts- und PK-Analyse bietet ACRO eine Reihe von Anti-MMAE-Antikörpern und anti-idiotypischen Antikörpern mit hoher Affinität, hoher Spezifität und hoher Empfindlichkeit an.
Wird für die positive Referenz der vorklinischen/klinischen Immunogenitäts- und PK-Analyse von ADCs verwendet;
Zeitersparnis dür den Kunden bei der Vorbereitung der Antikörper
Vollständige Methoden- und Verfahrensvorschriften sind frei verfügbar.

Fallstudie

PK-Assay: Anti-MMAE-Antikörper, der MMAE mit hoher Spezifität bindet
Anti-MMAE antibody binding MMAE with high specificity

The EC50 value of anti-MMAE antibody to MMAE-conjugated hRS7 (MMAE-ADC) was 0.12 μg/ml. The unconjugated hRS7 antibody was used as negative control

Anti-MMAE antibody binding MMAE-ADC with high specificity

Immobilized Disitamab Vedotin (RC48) at 0.2 μg/mL (100 μL/well) can bind Mouse Anti-MMAE Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. MME-M5252) with a linear range of 0.1-2 ng/mL (QC tested).

PK-Assay: Spezifischer Nachweis von Antikörperspiegeln im Körper
PK assay for ADCs: Specific detection of antibody drug levels in the body
Detection of Ritux*mab by antigen-capture ELISA (0.1% serum).
PK assay for ADCs: Specific detection of antibody drug levels in the body
Detection of Ritux*mab by anti-idiotypic capture ELISA (0.1% serum).
PK assay for ADCs: Specific detection of antibody drug levels in the body
Detection of Ritux*mab by anti-idiotypic bridging ELISA (10% serum).
Method Coated Sample Linear range
(µg/mL)
Sensitivity
(µg/mL)
Advantage
Antigen capture ELISA CD20 Goat anti-human IgG Simple and universal method
Anti-idiotypic capture ELISA Anti-Ritux*mab Antibodies Goat anti-human IgG 0.156-10 0.156 It is a simple method for extracting CD20
Bridging ELISA by anti-idiotypic antibodies Anti-Ritux*mab Antibodies Biotinylated Anti-Ritux*mab Antibodies 0.012-0.78 0.012 CD20 can be obtained with good sensitivity and low background noise
Vergleich zwischen anti-idiotypischem Capture-ELISA und anti-idiotypischem Bridging-ELISA zum Ritux*mab-Nachweis in Patientenproben
SPR/BLI-Analysedienst und Entwicklungsservice für antiidiotypische Antikörper
Darüber hinaus stützt sich ACROBiosystems auf ein sehr fähiges und hochprofessionelles Team und bietet Kunden zudem einen hochwertigen integrierten SPR&BLI-Analysedienst und Dienstleistungen aus einer Hand für monoklonale/polyklonale Anti-Idiotyp-Antikörper, die die Entwicklung Ihrer ADCs unterstützen.
SPR/BLI-Analysedienst
Zusammenarbeit mit Anwendern aus Industrie und Forschung im dreistelligen Bereich
Proteine kostenlos erhältlich;
Hochwertiges Qualitätsmanagement-Kontrollsystem;
Berichte frühestens am Folgetag;
Unterstützung von mehr als 300 Medikamenten bis zur klinischen Anwendung.
SPR/BLI analytical in ADCs
Entwicklungsservice für antiidiotypische Antikörper
ACRO-Proteine werden kostenlos geliefert;
Schnelle Reaktion, individueller Service durch das Projektteam, Nachverfolgung in Echtzeit;
Bereitstellung eines ganzheitlichen Service von der Antigenvorbereitung bis zur Entwicklung von Nachweiskits;
Garantierte Lieferung von PK/ADA-Nachweisreagenzien, deren Empfindlichkeit den behördlichen Anforderungen entspricht.
Anti-idiotypic antibody development service in ADCs

Referenz:

[1]Criscitiello C, et al. Antibody-drug conjugates in solid tumors: a look into novel targets. J Hematol Oncol. 2021 Jan 28;14(1):20.

[2]Poreba M. Protease-activated prodrugs: strategies, challenges, and future directions. FEBS J. 2020 May;287(10):1936-1969.

[3] Antibody drug conjugate: the “biological missile” for targeted cancer therapy

[4] Reducing the Complexity of Fc Glycan Enables the Construction of Antibody Conjugates with Unexpected High Efficiency and Payload Capacity via Glycoengineering

ACRO Quality

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