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CAR-spezifischer monoklonaler Antikörper zum Nachweis der Expression von Anti-CD19-CAR

Validierte Durchflusszytometrie und Verfahrensvorschriften werden kostenlos angeboten

Hintergrund

CD19 ist derzeit das am häufigsten verwendete Zielmolekül in der CAR-T-Therapie, die sich bei der Behandlung von B-ALL, CLL und B-Zell-Lymphomen als wirksam und sicher erwiesen hat. FMC63 ist ein monoklonaler Maus-Antikörper des Typs IgG2a gegen CD19. Bislang enthalten die meisten der gemeldeten CART19-Studien das von FMC63 abgeleitete Anti-CD19-scFv, darunter die beiden von der FDA zugelassenen CARs Kymriah und Yescarta.

Während die therapeutischen Ergebnisse für CD19-spezifische CAR-T-Zellen beeindruckend sind, ist die Qualitätskontrolle bei der Herstellung der Therapie ein Bereich, in dem weitere Fortschritte erforderlich sind. Unsere hochaffinen CD19-Proteine  können die Expression von Anti-CD19-CAR auf der Oberfläche transduzierter T-Zellen wirksam nachweisen und sind für ihre hohe Sensitivität und Spezifität weithin anerkannt. Dies hochaffinen CD19-Proteine  wurden in großem Umfang für die Qualitätskontrolle von Freigabetests und für pharmakokinetische (PK) Studien von Anti-CD19-CAR-T-Zellen in klinischen Studien verwendet.

Nachdem ACROBiosystems positive Rückmeldungen zu hochaffinen CD19-Proteinen auf dem Markt erhalten hatte, entwickelte das Unternehmen nun einen anti-idiotypischen Antikörper gegen FMC63 scFv, den monoklonalen Anti-FMC63 scFv-Antikörper, der insbesondere die Antigenerkennungsdomäne von FMC63-abgeleiteten Anti-CD19-CARs mit hoher Sensitivität und hoher Spezifität erkennen kann. Die Leistungsfähigkeit des monoklonalen Anti-FMC63 scFv-Antikörpers wurde mittels Durchflusszytometrie (FCM) intern validiert und eignet sich für den Nachweis von FMC63-abgeleiteten Anti-CD19-CARs in klinischen Studien.

Produktliste
Molecule Cat. No. Source Product Description
Produktmerkmale

Keine Hintergrundfärbung beim Nachweis von FMC63-abgeleiteten Anti-CD19-CARs in klinischen Studien

Detection of Anti-CD19 (FMC63) CAR Expression

2e5 of FMC63 scFv-based anti-CD19 CAR-293 cells were stained with 100 µL of the working solution of Monoclonal AntiFMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. FM3-Y45) and isotype control respectively, washed and then followed by PE anti-mouse IgG1 Antibody and analyzed with flow cytometry (QC tested).

Assessment of Non-specific Binding to 293 Cells

Non-specific binding of Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody (Cat. No. FM3-Y45) to non-transfected 293 cells was determined by flow cytometry. The data showed that Anti-FMC63 scFv Antibody didn’t bind to non-transfected 293 cells.


Assessment of Non-specific Binding to PBMCs

Non-specific binding of Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody (Cat. No. FM3-Y45) to non-transfected human PBMCs was determined by flow cytometry. The data showed that Anti-FMC63 scFv Antibody didn’t bind to non-transfected human PBMCs.

Kann insbesondere die Antigenbindungsstelle von FMC63-abgeleiteten CARs mit hoher Affinität erkennen

Binding Activity and Specificity Measured by ELISA

Immobilized FMC63 scFv, His Tag at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Clone Y45) with a linear range of 1-19 ng/mL. Anti-DNP antibody, mouse IgG1 (Cat. No. DNP-M1) was used as an isotype control (QC tested).


Neutralizing Activity Measured by ELISA

ELISA analysis shows that the binding of Human CD19, Fc Tag (Cat. No. CD9-H5251) to FMC63 scFv, His Tag was inhibited by increasing concentration of Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Clone Y45). The concentration of Human CD19, Fc Tag used is 5 μg/mL (100 μL/well). The IC50 is 0.084 μg/mL (Routinely tested).

High Affinity Determined by SPR

Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. FM3-Y45) captured on CM5 chip via anti-mouse antibodies surface can bind FMC63 scFv with an affinity constant of 1.08 nM as determined in a SPR assay.

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