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CAR-spezifischer monoklonaler Antikörper zum Nachweis der Expression von Anti-CD19-CAR

Validierte Durchflusszytometrie und Verfahrensvorschriften werden kostenlos angeboten

CAR-specific Monoclonal Antibody to Detect Anti-CD19 CAR Expression
Hintergrund

CD19 ist derzeit das am häufigsten verwendete Zielmolekül in der CAR-T-Therapie, die sich bei der Behandlung von B-ALL, CLL und B-Zell-Lymphomen als wirksam und sicher erwiesen hat. FMC63 ist ein monoklonaler Maus-Antikörper des Typs IgG2a gegen CD19. Bislang enthalten die meisten der gemeldeten CART19-Studien das von FMC63 abgeleitete Anti-CD19-scFv, darunter die beiden von der FDA zugelassenen CARs Kymriah und Yescarta.

Während die therapeutischen Ergebnisse für CD19-spezifische CAR-T-Zellen beeindruckend sind, ist die Qualitätskontrolle bei der Herstellung der Therapie ein Bereich, in dem weitere Fortschritte erforderlich sind. Unsere hochaffinen CD19-Proteine  können die Expression von Anti-CD19-CAR auf der Oberfläche transduzierter T-Zellen wirksam nachweisen und sind für ihre hohe Sensitivität und Spezifität weithin anerkannt. Dies hochaffinen CD19-Proteine  wurden in großem Umfang für die Qualitätskontrolle von Freigabetests und für pharmakokinetische (PK) Studien von Anti-CD19-CAR-T-Zellen in klinischen Studien verwendet.

Nachdem ACROBiosystems positive Rückmeldungen zu hochaffinen CD19-Proteinen auf dem Markt erhalten hatte, entwickelte das Unternehmen nun einen anti-idiotypischen Antikörper gegen FMC63 scFv, den monoklonalen Anti-FMC63 scFv-Antikörper, der insbesondere die Antigenerkennungsdomäne von FMC63-abgeleiteten Anti-CD19-CARs mit hoher Sensitivität und hoher Spezifität erkennen kann. Die Leistungsfähigkeit des monoklonalen Anti-FMC63 scFv-Antikörpers wurde mittels Durchflusszytometrie (FCM) intern validiert und eignet sich für den Nachweis von FMC63-abgeleiteten Anti-CD19-CARs in klinischen Studien.

Er ist für die Zellisolierung und Zellkulturanwendungen bestimmt und wird unter tierversuchsfreien Bedingungen hergestellt. Während des gesamten Produktionsprozesses werden keine Bestandteile tierischen Ursprungs verwendet. Er wird im Rahmen unseres strengen Qualitätskontrollsystems unter Zuhilfenahme einer umfassenden Reihe von Tests, einschließlich Sterilitäts- und Endotoxintests, hergestellt. Die Produktleistung wird sorgfältig validiert und auf Kompatibilität für die Verwendung in Zellkulturen oder anderen Anwendungen im frühen vorklinischen Stadium getestet.

Produktliste
MoleculeCat. No.SourceProduct Description
Produktmerkmale

Keine Hintergrundfärbung beim Nachweis von FMC63-abgeleiteten Anti-CD19-CARs in klinischen Studien

Detection of Anti-CD19 (FMC63) CAR Expression

2e5 of FMC63 scFv-based anti-CD19 CAR-293 cells were stained with 100 µL of the working solution of Monoclonal AntiFMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. FM3-Y45) and isotype control respectively, washed and then followed by PE anti-mouse IgG1 Antibody and analyzed with flow cytometry (QC tested).

Assessment of Non-specific Binding to 293 Cells

Non-specific binding of Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody (Cat. No. FM3-Y45) to non-transfected 293 cells was determined by flow cytometry. The data showed that Anti-FMC63 scFv Antibody didn’t bind to non-transfected 293 cells.


Assessment of Non-specific Binding to PBMCs

Non-specific binding of Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody (Cat. No. FM3-Y45) to non-transfected human PBMCs was determined by flow cytometry. The data showed that Anti-FMC63 scFv Antibody didn’t bind to non-transfected human PBMCs.

Kann insbesondere die Antigenbindungsstelle von FMC63-abgeleiteten CARs mit hoher Affinität erkennen

Binding Activity and Specificity Measured by ELISA

Immobilized FMC63 scFv, His Tag at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Clone Y45) with a linear range of 1-19 ng/mL. Anti-DNP antibody, mouse IgG1 (Cat. No. DNP-M1) was used as an isotype control (QC tested).


Neutralizing Activity Measured by ELISA

ELISA analysis shows that the binding of Human CD19, Fc Tag (Cat. No. CD9-H5251) to FMC63 scFv, His Tag was inhibited by increasing concentration of Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Clone Y45). The concentration of Human CD19, Fc Tag used is 5 μg/mL (100 μL/well). The IC50 is 0.084 μg/mL (Routinely tested).

High Affinity Determined by SPR

Monoclonal Anti-FMC63 scFv Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. FM3-Y45) captured on CM5 chip via anti-mouse antibodies surface can bind FMC63 scFv with an affinity constant of 1.08 nM as determined in a SPR assay.

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