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Anti-idiotypische Antikörper

Hintergrund

Ein Idiotop ist die einzigartige Menge antigener Determinanten (Epitope) des variablen Teils eines Antikörpers. Ein anti-idiotypischer (Anti-ID) Antikörper bindet an das Idiotop eines anderen Antikörpers, normalerweise eines Antikörper-Medikaments, was ihn zu einem sehr leistungsfähigen Werkzeug für die Entwicklung von Antikörper-Medikamenten macht, insbesondere für die Immunogenitäts- und PK/PD-Analyse.

Zur Unterstützung der vorklinischen/klinischen Immunogenitäts- und PK-Analyse hat ACROBiosystems eine Reihe hochaffiner anti-idiotypischer Antikörper entwickelt. Unsere Pipeline umfasst fünf heiße Ziele, darunter adalim*mab, Ritux*mab, Cetux*mab, Trastuz*mab und Bevaciz*mab. Um den Arzneimittelentwicklungsprozess zu unterstützen, stellen wir Testprotokolle bereit, die auf verschiedene Anwendungsszenarien angewendet werden können.

Produktliste
MoleculeCat. No.AntigenNeutralizing ActivityApplication
Adalimu*abADB-Y19Anti-Adalimu*ab Antibodies (AY19)Neutralizing AntibodyADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Adalimu*abADB-Y23bAnti-Adalimu*ab Antibodies (AY23b) (recommended for PK/PD)Non-Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA; Indirect ELISA
Bevacizu*abBEB-Y10Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY10) (MALS verified, recommended for PK/PD)Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*abBEB-Y12Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY12) (recommended for neutralizing assay)Neutralizing AntibodyADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*abBEB-Y9Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY9) (recommended for ADA assay)Neutralizing AntibodyADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*abBEB-BY13Biotinylated Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY13) (recommended for PK/PD)Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*abCEB-Y27Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY27) (recommended for ADA assay)Neutralizing AntibodyADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*abCEB-Y31Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY31) (Non-Neutralizing)Non-Neutralizing AntibodyADA assay; Indirect ELISA
Cetuxi*abCEB-Y29Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY29) (recommended for PK/PD)Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*abCEB-Y28Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY28)Neutralizing AntibodyADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*abCEB-BY31Biotinylated Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY31) (recommended for PK/PD)Non-Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA; Indirect ELISA
Rituxi*abRIB-Y36Anti-Rituxi*ab Antibodies (AY36) (recommended for ADA assay)Neutralizing AntibodyADA assay;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Rituxi*abRIB-Y37Anti-Rituxi*ab Antibodies (AY37) (recommended for PK/PD)Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA;Neutralizing assay;Indirect ELISA
Rituxi*abRIB-FY35cFITC-Labeled Anti-Rituxi*ab Antibodies, Mouse IgG1Neutralizing AntibodyADA assay;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Rituxi*abRIB-Y35cAnti-Rituxi*ab Antibodies (MALS verified)Non-Neutralizing AntibodyADA assay; Indirect ELISA
Trastuzu*abTRB-Y5bAnti-Trastuzu*ab Antibodies (AY5b) (recommended for PK/PD)Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA
Trastuzu*abTRB-Y1bAnti-Trastuzu*ab Antibodies (AY1b) (recommended for PK/PD)Neutralizing AntibodyPK bridging ELISA; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Anwendung
ADA Assay – Perfekt als Kalibrator

Therapeutische Proteine wie monoklonale Antikörper sind derzeit bei der Behandlung von Krebs, Autoimmunkrankheiten und anderen Krankheiten unerlässlich. Da Protein die intrinsische Eigenschaft der Immunogenität aufweist, was an seiner potenziell B-Zellen- und T-Zellen-Epitope enthaltenden Struktur liegt, haben therapeutische Proteine das Potenzial, Anti-Drug-Antikörper (ADA) zu induzieren, selbst wenn das Protein dieselbe Aminosäuresequenz hat wie der endogene human Proteine. Das Auftreten von ADA bei Patienten kann möglicherweise zu einem Wirksamkeitsverlust und/oder Nebenwirkungen führen. Daher sind während der Entwicklung therapeutischer Proteinprodukte eine Immunogenitäts-Risikobewertung und risikomindernde Strategien erforderlich.

Die interne Entwicklung eines mono-/multiklonalen Antikörpers als Positivkontrolle für den ADA-Assay ist extrem zeitaufwändig. Um dieses Problem zu lösen, hat ACROBiosystems eine Reihe von Anti-Drogen-Antikörper-Standards für ADA-Assays entwickelt.

Case 1 Anti-Ritux*mab Antibodies ( RIB-Y36)

Anti-Ritux*mab Antibodies bridging ELISA for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Immobilized Ritux*mab at 1 µg/ml, added increasing concentrations of Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-Y36, 10% human serum) and then added biotinylated Ritux*mab at 2 µg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 9.7 ng/mL.

Anti-Ritux*mab Antibodies bridging MSD for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Added the mix solution (biotinylated Ritux*mab at 5 µg/mL, SULFO-Ritux*mab at 5Nµg/mL and increasing concentrations of Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-Y36, 100% human serum). Detection was performed using MSD Assay with a sensitivity of 0.97 ng/mL.

Case 2 Anti-Adalim*mab Antibodies (ADB-Y19)

Anti-Adalim*mab Antibodies bridging ELISA for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Immobilized adalim*mab at 1 µg/ml, add increasing concentrations of Anti-Adalim*mab Antibodies (Cat. No. ADB-Y19, 10% human serum) and then add biotinylated adalim*mab at 5 µg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 0.6 ng/mL.

Measured by its neutralizing ability in a functional ELISA. Immobilized adalim*mab at 0.5 μg/mL (100 μL/well) can bind pre-mixed Anti-Adalim*mab Antibodies (Cat. No. ADB-Y19) and Biotinylated Human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) with an inhibition rate of 100%.

PK-Assay – Quantitative Analyse von therapeutischem Antikörper in der Matrix

ELISA ist die am häufigsten verwendete Technologie zur quantitativen Analyse von therapeutischen Antikörpern in der Matrix. Dies erfolgt häufig durch indirekten ELISA, kompetitiven ELISA, Sandwich-ELISA oder Bridging-ELISA. Unter ihnen wird der Bridging-ELISA aufgrund seines geringen unspezifischen Hintergrunds und seiner hohen Empfindlichkeit als die beste Option angesehen. Wir können aus den Daten ersehen, dass die Verwendung von Ziegen-Anti-Human-IgG als Sekundärantikörper aufgrund unspezifischer Bindung zu einem hohen Hintergrund führt und daher vor Analysen eine Vorverdünnung erfordert. Andererseits verwendet der Bridging-ELISA durch anti-idiotypische Antikörper HRP-konjugiertes Streptavidin für den sekundären Nachweis, wodurch die Hintergrundinterferenz minimiert wird. ACROBiosystems hat eine Reihe von anti-idiotypischen Antikörpern entwickelt, die für den Bridging-ELISA verwendet werden.

Comparison between anti-idiotypic capture ELISA and anti-idiotypic bridging ELISA for Ritux*mab detection in patient samples. Left: anti-idiotypic capture ELISA; Right: anti-idiotypic bridging ELISA.

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Detection of Ritux*mab by bridging ELISA in serum. Immobilized Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-Y37) at 2 μg/ml, added increasing concentrations of Ritux*mab (10% human serum) and then added biotinylated Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-BY35) at 1 μg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 1 ng/ml.

Merkmale
Hohe Affinität
Affinität misst die Stärke der Wechselwirkung zwischen einem Antigen und einem Antikörper, die als KD beschrieben werden kann. Eine kleinere KD stellt die stärkere Affinität dar. Wir haben die Affinität aller Anti-Idiotyp-Antikörper unter Verwendung des SPR-Verfahrens gemessen. Diese Daten helfen bei der Vorhersage der Sensitivität in der Assay-Entwicklung.

Anti-Adalim*mab Antibodies (mouse IgG1, Cat. No. ADB-Y19) captured on CM5 chip via anti-mouse antibodies surface, can bind human adalim*mab with an affinity constant of 1.36 pM.

Hohe Spezifität
Wir haben die Spezifität jedes Anti-Idiotyp-Antikörperprodukts sichergestellt, bevor es auf den Markt kommt.
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Demonstration of the specificity of Anti-Cetux*mab Antibodies (Cat. No. CEB-Y28) to the Cetux*mab.

Hohe Stabilität
ACROBiosystems hat beschleunigte Stabilitätstests und Einfrier-Auftau-Tests durchgeführt, um die Stabilität unserer Produkte sicherzustellen, bevor sie auf den Markt kommen.

Reconstituted Anti-Trastuz*mab Antibodies were diluted to 0.4 mg/ml, aliquoted and placed at 37°C. Aliquots were removed from 37°C at every time point and placed at 4°C along with the control. No significant loss of activity was observed.

Anti-Trastuz*mab Antibodies were subjected to the indicated number of freeze-thaw cycles (FT). No significant loss of activity was observed.

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