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Lösungen zur Bewertung der CAR-Expression


Fluoreszenzmarkierte Proteine
Fluorescence-labeled Proteins
Biotinylierte Proteine
Biotinylated Proteins
Unkonjugierte Proteine
Unconjugated Proteins

Die chimäre Antigenrezeptor-T (CAR-T)-Zelltherapie ist eine neue Behandlung für eine Vielzahl von Krebsarten. Der Grundgedanke dahinter ist, die T-Zellen des Patienten zu entnehmen und die Zellen gentechnisch so zu manipulieren, dass sie einen chimären Antigenrezeptor (CAR) exprimieren, der ein spezifisches Tumor-assoziiertes Antigen (TAAs) erkennt. Infolgedessen werden die CAR-exprimierenden T-Zellen, wenn sie wieder in den Körper des Patienten eingeführt werden, die TAA-exprimierenden Tumorzellen anvisieren und eliminieren.

Die Bewertung der CAR-Expression ist ein wesentlicher Schritt bei der Produktion von CAR-T-Zellen. Dies erfolgt häufig mittels Durchflusszytometrie unter Verwendung von Protein L, Anti-Fab-Antikörpern oder Zielantigenen als Nachweisverfahren. Unter diesen gängigen Optionen werden Zielantigene allgemein als die beste Option angesehen, da sie eine hohe Spezifität und minimale Hintergrundfärbung bieten.

ACROBiosystems hat eine umfangreiche Sammlung rekombinanter Proteine entwickelt, um die Entwicklung der CAR-T-Therapie zu unterstützen. Diese wachsende Anzahl von Proteinen umfasst viele fluoreszenzmarkierte Zielantigene und vorbiotinylierte Proteine, die sich in einzigartiger Weise für die Bewertung der CAR-Expression eignen. Darüber hinaus liefern wir auch schwer zu exprimierende Proteine wie BCMA, CD19, ROR1 und EGFRVIII.

CAR-Erkennungsstrategie und Produktdesign
Direkte Methode — Fluoreszenzmarkierte Proteine
Fluorescence-labeled Proteins
HAUPTMERKMALE
Zielantigene sind mit einem fluoreszierenden Farbstoff vormarkiert.
Die Verarbeitungszeit kann durch die Verwendung von direkt markierten Proteinen reduziert werden.
Die unspezifische Reaktion eines sekundären Antikörpers wird eliminiert.
> PE-gekennzeichnet (Klicken Sie auf das  Molekül um Produktdetails anzuzeigen) -> Speziell entwickelt
> FITC-gekennzeichnet (Klicken Sie auf das Molekül, um Produktdetails anzuzeigen)-> Speziell entwickelt
> Case Study
Evaluation of Anti-CD19 CAR Expression with FITC-labeled CD19
CD19 CAR detection verified by FACS
293 cells were transfected with anti-CD19-scFv and RFP tag. 2e5 of the cells were stained with B. FITC-Labeled Human CD19 (20-291) (Cat. No. CD9-HF2H2, 10 µg/ml) and C. FITC-labeled protein control. A. Non-transfected 293 cells and C. FITC-labeled protein control were used as negative control. RFP was used to evaluate CAR (anti-CD19-scFv) expression and FITC was used to evaluate the binding activity of FITC-labeled Human CD19 (20-291) (Cat. No. CD9-HF2H2).
> Anwendung —Bewertung der CAR-Expression

Biotin-Streptavidin-basierter Nachweis mit biotinylierten Proteinen

Biotinylated Proteins
HAUPTMERKMALE
Zielantigene sind mit Biotin vormarkiert und werden durch markiertes Streptavidin (den Biotin-Avidin-Komplex) nachgewiesen.
Mit Fluorochromen markiertes Streptavidin kann biotinylierte Proteine mit hoher Affinität und Spezifität binden, das Signal verstärken und die Nachweisempfindlichkeit und -spezifität verbessern.
>  Biotinylierte Proteine -> Speziell entwickelt
> Case Study
Evaluation of Anti-BCMA CAR Expression with Biotinylated BCMA
BCMA CAR detection verified by FACS
Human T cells were transfected with anti-BCMA CAR and cultured for 3 days. Three days post-transfection, 1e6 cells were first incubated with 50 µl biotinylated human BCMA protein (Cat. No. BC7-H82F0, 8 µg/ml), washed and then stained with PE Streptavidin and analyzed by flow cytometry. (Data are kindly provided by PREGENE Biopharma)
> Anwendung — Auswertung der CAR-Expression

Indirekter Nachweis mit unkonjugierten Proteinen

Unconjugated Proteins
HAUPTMERKMALE
Zielantigene sind so konzipiert, dass sie ein spezifisches Tag tragen und mit einem sekundären Antikörper (Anti-Epitop-Tag-Antikörper) nachgewiesen werden, der mit einem Fluorophor markiert ist.
Es kann zu einer unspezifischen Reaktion eines sekundären Antikörpers kommen.
> Unkonjugierte Proteine -> Speziell entwickelt
> Case Study
Evaluation of Anti-CD19 CAR Expression with Fc-fusion CD19
CD19 (Fc Tag  CAR detection verified by FACS
293 cells were transfected with FMC63-scFv and RFP tag. 2e5 of the cells were first stained with B. Human CD19 (20-291) Protein, Fc Tag, low endotoxin (Super affinity) (Cat. No. CD9-H5251 , 3 µg/ml) and C. Human Fc Tag Protein Control, followed by FITC-conjugated Anti-human IgG Fc Antibody. A. Non-transfected 293 cells and C. Human Fc Tag Protein Control were used as negative control. RFP was used to evaluate CAR (anti-CD19-scFv) expression and FITC was used to evaluate the binding activity of Human CD19 (20-291) Protein, Fc Tag, low endotoxin (Super affinity) (Cat. No. CD9-H5251).
> Anwendung — Auswertung der CAR-Expression

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