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> Wachstumsfaktoren für die Kultivierung induzierter pluripotenter Stammzellen
Cancers 2022, 14, 2266
iPSC-T-Zelle
Der klassische Ansatz zur Erzeugung von iPSC-abgeleiteten T-Zellen beginnt bei:
1. Co-Kultivierung von iPSCs, die von gesunden Spendern stammen, mit Stromazellen aus dem Knochenmark der Maus (C3H10T1/2 oder OP9) zur Erzeugung von CD34+ hämatopoetischen Vorläuferzellen.
2. Hämatopoetische Vorläuferzellen werden angereichert und mit der OP9-Zelllinie co-kultiviert, die DLL-1/DLL-4 überexprimiert und zusätzliche Zytokine enthält, um die T-Zell-Differenzierung zu fördern.
iPSC-NK-Zelle
Generierung von iPSC-abgeleiteten NK-Zellen:
1. Die von gesunden Spendern stammenden iPSCs werden mit der Stromazelllinie M210-B4 aus dem Knochenmark der Maus etwa 20 Tage lang co-kultiviert, um die Bildung von CD34+ hämatopoetischen Vorläuferzellen zu ermöglichen.
2. CD34 + hämatopoetische Vorläuferzellen werden dann angereichert und 4 bis 5 Wochen lang mit einer Monoschicht aus murinem AFT024 (einer aus fötaler Leber stammenden Stromazelllinie) oder EL08-1D2-Stromazellen mit definierten Zytokinen kultiviert, wodurch schließlich reife NK-Zellen entstehen.
iPSC-Makrophagen
Die Bildung von iPSC-abgeleiteten Makrophagen Mφs erfordert eine komplexere Methodik:
1. Die Bildung von Embryoidkörpern (EBs) ist die am häufigsten verwendete Methode zur Differenzierung von aus iPSC abgeleiteten Mφs, wobei spezifische Modifikationen wie Rotationssuspensionen, Mikrotiterplatten, mikrofluidische Hanging-Drop-Chips und andere verwendet werden.
2. Nach der Bildung von iPSC-abgeleiteten EBs werden myeloische Mφs durch die Zugabe von Zytokinen, einschließlich GM-CSF, M-CSF, IL-3 und IL-4, weiter induziert.
Steril
Frei von tierischem Ursprungsmaterial
Hohe Reinheit ≥95%
Hohe Bioaktivität, bestätigt durch zellbasierte Assays
ActiveMax®, Premium und GMP-Qualitäten verfügbar
Geringes Endotoxin ≤0.1 EU/µg
Trägerfrei
Ähnlich wie Natürliche Konformation und Modifikationen
Konsistent zwischen Chargen
Der Übergang von Premium zu GMP 
Zytokine sind wichtige Rohstoffe, die bei der Zellkultivierung für zell- und gentherapeutische Arzneimittel (CGT) verwendet werden. In der vorklinischen Phase wird in der Regel weder der Sicherheit noch der Qualität der Rohstoffe Priorität eingeräumt. In diesem Fall können Produkte nur für Forschungszwecke verwendet werden. In späteren Phasen der Arzneimittelentwicklung, z. B. in der CMC- oder klinischen Phase, ist es jedoch notwendig, die Rohstoffe durch GMP-konforme Materialien zu ersetzen, um die behördlichen Richtlinien zu erfüllen. In dieser Übergangsphase wird viel Energie in die Neubewertung und Validierung neuer Rohstoffe gesteckt.
Um den Übergang von der vorklinischen Entwicklung in die klinische Phase zu erleichtern, bieten wir verschiedene Zytokinqualitäten an, die als nahezu identisch in ihrer Bioaktivität bewertet wurden, zusammen mit der für GMP-Produkte erforderlichen Dokumentation. Wir empfehlen die Verwendung unserer Premium-Rohstoffe in der frühen Entwicklungsphase, um beim Eintritt in die CMC- oder klinischen Phasen nahtlos auf unsere GMP-Rohstoffe übergehen und die Anzahl der durchgeführten Reevaluierungs- und Validierungsstudien minimieren zu können.
GMP Human IL-15 Protein on SDS-PAGE under reducing (R) condition. The gel was stained overnight with Coomassie Blue. The purity of the protein is greater than 95%.
Human IL-2, premium grade on SDS-PAGE under reducing (R) condition. The gel was stained overnight with Coomassie Blue. The purity of the protein is greater than 95%.
Human DLL4 Protein, Fc Tag, premium grade on SDS-PAGE under reducing (R) condition. The gel was stained overnight with Coomassie Blue. The purity of the protein is greater than 95%.
Human VEGF165, premium grade (Cat. No. VE5-H4210) stimulates proliferation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). The ED50 for this effect is 4.216-9.281 ng/mL.
Human IL-2, premium grade (Cat. No. IL2-H5215) stimulates proliferation of CTLL-2 cells. The EC50 for this effect is 1.996 ng/mL, corresponding to a specific activity of 5 ⅹ10^6 IU/mg, which is calibrated against Interleukin-2 (Human, rDNA derived) (2nd International Standard) (NIBSC code: 86/500).
Immobilized Human DLL4 Protein, Fc Tag, premium grade (Cat. No. DL4-H5259) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-Human DLL4 Antibody, Human IgG1 with a linear range of 1-16 ng/mL.
Laminin 521 (LA5-H5261) could maintain the stemness of iPSC. Immunofluorescent staining indicated that the iPSCs expressed high levels of pluripotency associated markers Sox2, TRA-1-60, SSEA4 and OCT4.
Laminin 511 (LA8-H5283) could maintain the stemness of iPSC. Immunofluorescent staining indicated that the iPSCs expressed high levels of pluripotency associated markers Sox2, TRA-1-60, SSEA4 and OCT4.
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