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> AGLink® Ortsspezifisches Konjugationskit
Die gewählte Konjugationsmethode für antikörperbasierte konjugierte Arzneimittel spielt eine entscheidende Rolle bei der Bestimmung des Antikörper-Wirkstoff-Verhältnisses (DAR) und der Einheitlichkeit des resultierenden Produkts, was sich direkt auf dessen Wirksamkeit, Verträglichkeit und Stabilität auswirkt.
Konjugationsmethoden werden üblicherweise in zufällig oder ortsspezifisch eingeteilt. Die ortsspezifische Konjugation wird zunehmend bevorzugt, da sie zu konjugierten Arzneimitteln mit hoher Homogenität und verbesserten Sicherheitsprofilen führen kann.
Fast alle monoklonalen Antikörper sind an (oder um) Asn-297 der Fc-Domäne glykosyliert. Bei der Glykan-vermittelten Konjugation, einer bewährten ortsspezifischen Methode, werden die N297-Glykosylierungsstellen des Antikörpers für die Konjugation genutzt.
Da die Konjugation an dieser Stelle von der antigenbindenden Region weiter entfernt ist, bleibt die Bindungsfunktion des Antikörpers erhalten und das Risiko einer Beeinträchtigung seiner Antigenbindungsfähigkeit nach der Konjugation wird minimiert. Mit dieser Methode werden Modifikationen der Antikörperentwicklung überflüssig, was die Zweckmäßigkeit und die Vielseitigkeit erhöht und die Effizienz der Forschung im Frühstadium erheblich beschleunigt.
In Zusammenarbeit mit Glyco-Therapy Biotechnology Co., Ltd. haben wir das AGLink® DAR2&4 ortsspezifische Konjugationskit entwickelt. Das Kit basiert auf der YTConju™-Konjugationsplattform von Glyco-therapy und ermöglicht die effiziente Konjugation verschiedener Nutzlasten, einschließlich Toxin (MMAE), reaktiver funktioneller Gruppen (Tz/DBCO) und Nachweisetiketten (Biotin). Es wurde konzipiert, um die Forschung im Frühstadium sowie biologische Experimente auf dem Gebiet der konjugierten Arzneimittel zu unterstützen.
Ein-Gefäß, Ein-Schritt-Methode
DAR 2 oder DAR 4 Kit mit einem Kit erhältlich
Erzielung einheitlicher DAR-Werte über Nacht bis innerhalb von 24 Stunden
Klick Chemie kompatibel
Homogene und stabile Produkte nach der Konjugation
Verschiedene Arten von Konjugationskits zur Anwendung
For DAR4 Conjugation
For DAR2 Conjugation
Toxin
Reaktive funktionelle Gruppe
Erkennung Etikett
Konjugation mit MMAE für Antikörper-Screening, Vorbereitung und Leistungsstudien im ADC-Bereich.
HIC-HPLC analysis of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2)
The analysis of the antigen-binding capacity of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2), the results showing that binding to the HER2 antigen unaffected by the AGLink conjugation
Less than 5% of antibody aggregation by SEC-HPLC
MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2) are stable in human plasma in vitro
Validated in-vitro cell-killing activity of MMAE ADCs (DAR 4 & DAR 2)
DBCO: DBCO reagiert in der Click-Chemie mit N3-haltigen Molekülen, wodurch die Hydrophilie der modifizierten Moleküle erhöht wird.
Tetrazin: Tetrazin, das mit funktionellen BCN- oder TCO-Gruppen reaktiv ist, weist eine höhere Reaktivität auf und eignet sich daher besser für die Konjugation komplexer Moleküle.
Die Verwendung von Click-Chemie-Reaktionen ermöglicht die Konjugation einer Vielzahl von Bestandteilen, darunter Toxine, Fluoreszenzfarbstoffe, Oligonukleotide, Nanokörper und mehr.
Screening und Vorbereitung von Antikörpern zum Nachweis oder zur Diagnose
Homogenere Produkte und bessere Konsistenz von Charge zu Charge im Vergleich zur herkömmlichen chemischen Etikettierung
| Molecule | Cat. No. | Product Description | Preorder/Order |
|---|
1. Welche Mindestmenge an Antikörpern ist für das AGLink Konjugationskit geeignet?
Die Mindestanforderung beträgt 200 μg, wobei eine Wiederfindungsrate von über 85 % erwartet wird. Um diese Menge unterzubringen, verkleinern Sie die Reaktionsreagenzien proportional gemäß dem mitgelieferten Protokoll.
2. Ist es notwendig, den Antikörper gemäß dem Protokoll zu konzentrieren?
Für eine optimale Reaktionseffizienz wird empfohlen, den Antikörper auf die im Protokoll vorgeschlagene Konzentration zu konzentrieren. Wenn eine Konzentration nicht möglich ist, muss sichergestellt werden, dass die Antikörperkonzentration über 1 mg/ml bleibt und die Reaktionszeit muss auf 48 Stunden verlängert werden, um die Konjugationseffizienz zu erhalten.
3. Ist dieses Konjugationskit für Antikörper aller Arten geeignet?
Dieses Konjugationskit ist für die Konjugation humanisierter Antikörper hocheffektiv. Bei Mäuse- und Kaninchen-Antikörpern kann jedoch aufgrund ihrer komplexen Strukturen und unvollständigen Validierung eine längere Konjugationszeit von bis zu 48 Stunden erforderlich sein, um die Konjugationseffizienz zu erhöhen.
4. Kann der Linker im AGLink® ADC Konjugationskit hydrolysiert werden und wenn ja, mit welchen Mitteln?
Der Linker im AGLink® ADC Konjugationskit (MMAE, DAR 2 & 4, 1 mg & 5 mg) ist vc-PAB, das durch Cathepsin B gespalten werden kann. Die Spaltbarkeit von Linkern in anderen Kits hängt davon ab, ob ein spaltbarer Linker während der Click-Chemie-Konjugation verwendet wird.
5. Wie hoch ist die Konjugationseffizienz des Konjugationskits, und welche Methoden werden zum Nachweis des Verhältnisses von Wirkstoff zu Antikörper (DAR) des konjugierten Produkts verwendet?
Die Konjugationseffizienz dieser Kits kann mehr als 90 % betragen und der DAR-Wert kann mittels HIC-HPLC (MMAE) oder LC-MS (MMAE/DBCO/Tetrazin/Biotin) analysiert werden.
6. Wie ist das konjugierte Produkt zu lagern und wie stabil ist es unter diesen Bedingungen?
Es wird empfohlen, das konjugierte Produkt in PBS-Puffer zu lagern, wo es über sechs Monate bei -80°C aufbewahrt werden kann. Wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen sind zu vermeiden.
7. Welche Laborumgebung ist für dieses Kit erforderlich?
Das AGLink® Konjugationskit kann unter normalen Laborbedingungen verwendet werden. Stellen Sie sicher, dass Sie beim Umgang mit MMAE persönliche Schutzausrüstung (Laborkittel, Schutzbrille und chemikalienbeständige Nitrilhandschuhe) tragen.
8. Gibt es Patentbeschränkungen für dieses Produkt und werden sich diese auf die CMC-Entwicklung und die kommerzielle Produktion auswirken?
Das geistige Eigentum unseres AGLink®-Konjugationskits ist ganz oder teilweise durch ein Patent geschützt, das sich im Besitz oder unter der Kontrolle von Glyco-therapy Biotechnology Co. Ltd. befindet. Für weitere Informationen über die kommerziellen Rechte wenden Sie sich bitte an inquiry@acrobiosystems.com, sofern Sie Kommentare oder Bedenken haben.
9. Kann die ortsspezifische Konjugation auch dann durchgeführt werden, wenn die Fc-N297-Stelle mutiert ist?
Das derzeitige Konjugationskit ist für die ortsspezifische Modifizierung an glykosylierten Stellen konzipiert. Wird die N297 Fc-Glykosylierungsstelle entfernt, kann dieses Kit nicht verwendet werden. Eine ortsspezifische Konjugation kann jedoch auch mit anderen Methoden erreicht werden.
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