HEK293 Exprimiertes CD20-Protein in voller Länge mit Nanodisc / DDM / VLP

Auf der 61. Jahrestagung der American Society of Hematology (ASH) im Jahr 2019 wurden bispezifische Antikörper gegen CD20 auf der Oberfläche von B-Zellen und CD3 auf der Oberfläche von T-Zellen wie CD20-TCB vorgestellt, wobei vorläufige Ergebnisse klinischer Studien eine akzeptable Sicherheit und vielversprechende Wirksamkeit dieses Paars spezifischer Antikörper zeigten.

CD20 ist ein gefragtes Ziel für die Behandlung von Lymphomen, Leukämie und einigen Autoimmunerkrankungen. Aufgrund des niedrigen Expressionstiters und der instabilen Bioaktivität ist es jedoch sehr schwierig, ein aktives CD20-Protein auf dem Markt für die Antikörper-Arzneimittelentwicklung und die CD20-CAR-Expression zu finden.

Um diese Probleme anzugehen, hat ACROBiosystems die hochaktiven Multi-Transmembran-CD20-Proteine in voller Länge entwickelt, die von HEK293-Zellen exprimiert werden. Die aktiven CD20-Proteine voller Länge tragen sowohl große als auch kleine ECD-Schleifen und binden Anti-CD20-Antikörper mit hoher Bindungsaffinität in ELISA- und SPR-Assays. Wir bieten verschiedene Arten von CD20-Proteinen an, darunter unkonjugiertes Protein, biotinylierte Proteine mit DDM, Nanodisc und VLP, die für Immunisierung, ELISA, SPR, BLI und FACS geeignet sind.

DDM kann die Lipidmembran auflösen, um das Membranprotein freizusetzen und eine hydrophobe Umgebung bereitzustellen, die hydrophobe Transmembranstruktur von Membranproteinen aufrechtzuerhalten und zu schützen. Für Zellversuche wird es jedoch nicht empfohlen, da es die Struktur der Zellmembran zerstören kann.

Nanodisc ist eine nicht-kovalente Struktur aus einer Phospholipid-Doppelschicht und einem Membrangerüstprotein. Membranproteine können in Nanodiscs integriert werden, um deren biologische Aktivität aufrechtzuerhalten, CD20-Protein mit Nanodisc wurde für Zellexperimente empfohlen.

Die auf dem HEK293-Expressionssystem basierende Technologieplattform VLP (Virus like Particles/virusähnliche Partikel) wurde von ACROBiosystems speziell für die Expression von Transmembranproteinen auf der Wirtszelloberfläche entwickelt. Das Virushüllen-/Kapsidprotein wandelt diese Zelloberflächen dann in lösliche Lipiddoppelschichtpartikel mit hochkonzentrierten Proteinen um, die für Antikörperimmunisierung und -screening zugänglich sind. Der Membranprotein-VLP-Komplex zeigt in seiner Zellmembran korrekt gefaltetete Auslöse- und Filter-Antikörper, die die natürliche Konformation des Ziels erkennen.

CD20-Protein in voller Länge hat eine vollständige Konformation mit sowohl kleinen als auch großen Schleifen.

CD20-Protein in voller Länge hat eine bessere Bioaktivität

Die Bioaktivität des CD20-Proteins in voller Länge wurde durch FACS/ELISA/SPR bestätigt, Verfahrensbeschreibungen sind erhältlich.

Cat. No. CD0-H82E3 (HEK293 expression)

FACS Analysis of anti-CD20 CAR expression

2e5 of CD20-CAR-293 cells transfected with anti-CD20-scFv were stained with 100 μL of 3 μg/mL of Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (Cat. No. CD0-H82E3) and negative control protein respectively, washed and then followed by PE-SA and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H1 (HEK293 expression)

FACS Analysis of anti-CD20 CAR expression

2e5 of CD20-CAR-293 cells transfected with anti-CD20-scFv were stained with 100 μL of 3 μg/mL of Human CD20 / MS4A1 Full Length Protein, His Tag (Nanodisc) (HEK293)(Cat. No. CD0-H52H1) and negative control protein respectively, washed and then followed by PE anti-His antibody and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol

Cat. No. CD0-H82E3 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 5 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (Cat. No. CD0-H82E3) with a linear range of 0.008-0.125 μg/mL

Protocol

Cat. No. CD0-H52H1 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag (Cat. No. CD0-H52H1) with a linear range of 1-63 ng/mL

Protocol

Cat. No.CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) with a linear range of 4-63 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No.CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Immobilized anti-CD20 antibody at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) with a linear range of 4-63 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) with a linear range of 0.4-3 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Immobilized anti-CD20 antibody at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) with a linear range of 0.4-6 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Biotinylated Human CD20, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) captured on Biotin CAP-Series S Sensor Chip can bind RTX with an affinity constant of 1.73 nM as determined in a SPR assay (in presence of DDM and CHS) (Biacore T200).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) captured on CM5 chip via Anti-human IgG Fc antibodies surface can bind RTX with an affinity constant of 6.21 nM as determined in a SPR assay (in presence of DDM and CHS) (Biacore 8K).

Protocol